"Pruebas serológicas"
Se amoldaron a la técnica de Boyden las pruebas de hemaglutinación indirecta, utilizando hematíes tratados con ácido tánico y sensibilizados con varios antígenos parasitarios. Se empleó el procedimiento siguiente: con todos los antígenos excepto el de la malaria, para el que se recomiendan ligeras modificaciones de la técnica. Se recogieron asépticamente hematíes frescos de oveja, en citrato de sodio al 8.3 % y se almacenaron a la temperatura de 4°C (se emplearon hematíes humanos del grupo 0 con el antígeno de malaria). Los hematíes se lavaron tres veces con solución salina esterilizada de fosfato (SSF) a un pH de 7.2 y se ajustaron a una suspensión al 3.8% con SSF. Se agregó un volumen igual de 1:20,000 (peso/vol) de ácido tánico en SSF y la mezcla se incubó durante 15 minutos a 37°C. Una vez tratados con ácido tánico, los hematíes fueron centrifugados, lavados una vez con SSF a un pH de 7.2 y luego se suspendieron otra vez a una concentración de 2.5% con SSF a un pH de 6.4. Para sensibilizar los hematies se añadió un volumen igual de una dilución previamente determinada de antígeno; la mezcla se incubó durante 15 minutos a 37°C. Después de la centrifugación y eliminación de la solución de antígeno, los hematíes sensibilizados se lavaron dos veces con suero normal de conejo (SNC) al 1% diluido enSSF a un pH de 7.2 y se formó una suspensión de hematíes al 1% en SNC para su empleo en la prueba. Los especímenes de suero fueron inactivados durante 30 minutos a 56°C. Se empleó como diluyente SNC al 1% (en SSF a un pH de 7.2) y se agregaron 0.05 ml a cada celda de placas de microtitulación desechables. A la primera celda se añadieron 0.05 ml de un suero de ensayo. A continuación se prepararon diluciones de sueros empezando por 1:2 hasta llegar a 1:4,096. Se agregó a cada celda de dilución de suero una gota (0.025 ml) de la suspensión al 1% de células sensibilizadas; se agitaron las placas y se dejaron sedimentar los hematíes. Una capa de hematíes, equivalente a una reacción 4 + indicaba el punto terminal de una prueba positiva. La reacción era negativa cuando los hematíes sedimentados formaban un fondo campacto o un anillo en el centro de la celda. Para la prueba de fijación del complemento, se empleó el método estandarizado por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C.) para su uso con antígenos bacterianos, víricos y parasitarios adaptados a una microtécnica. Este método requiere el empleo de la técnica del complemento hemolítico al 50% y una estandarización precisa de todos los reactivos (II). Se incluyeron en cada prueba serológica dos sueros testigo de pacientes que eran casos demostrados de la enfermedad en cuestión.
Antígenos Toxoplasma.
Amibas. Un extracto crudo de organismos E. histolyticu cultivados, desintegrados por sonificación (1, 14).
INFORMACIÓN RECUPERADA DE: https://drive.google.com/file/d/1St1eAR7tnBLplk0Kz1FwZcpzTyexxS25/view?usp=drive_open
Plasmodios. Un extracto de solución salina activa de organismos P. knowlesi, recogidos de sangre de mono infectado (1, 10).
Tenia. Un extracto de solución salina de quistes de C. cellulosae tratados con acetona antes de la extracción (1) .
Equinococos. Líquido hidatídico concentrado de quistes de E. granulosus de oveja infectada (1, 15).
Resultados:
Trypanosoma cruzi . Se observaron reacciones positivas en 47 de los 161 sueros (29%) de la zona 1 de ”Oaxaca, con un extracto de antígeno T. cruzi en la prueba HAT. Este resultado contrastó con los bajos índices (de 0 a 2.6% ) registrados en otras zonas del estado. Dentro de la zona 1, 17 de las 38 personas (45% ) de Chila resultaron positivas, lo mismo que 4 de las 55
(7% ) de Puerto Escondido y 25 de 68 (37%) de otros pueblos vecinos, incluido San Pedro Mixtepec. No se observó ninguna diferencia por sexo en la distribución de los títulos de hemaglutinación en la zona 1. El análisis por edad de los datos de la zona 1 (excluido Puerto Escondido) reveló un aumento progresivo del porcentaje de reacciones positivas en cada decenio de la vida.
Todos los antígenos empleados en las pruebas serológicas .eran extractos solubles de los organismos parasitarios, con excepción del Echinococcus para el que se utilizó líquido cístico. A continuación se ofrece una breve descripción de la preparación de cada antígeno:
Hemoflagelados. Extractos de solución salina de organismos T. cruzi y L. donovani cultivados, deslipilizados con benzeno antes de la extracción (1, 12). La distribución de frecuencias de los títulos de hemaglutinación en sueros procedentes de la zona 1 formó una curva trimodal con títulos máximos de 1: 256 y 1: 1,024; la distribución de los títulos de las zonas II a V formó una curva bimodal con un bajo máximo a 1:256. Estas curvas, más la experiencia anterior con la prueba HA1 respecto de T. cruzi.
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